amjs澳金沙门欢迎您州立大学

预杂交和amjs澳金沙门欢迎您标记

amjs澳金沙门欢迎您

1. 将杂交炉设置为 65°C.
2. 解冻³²引擎盖中的P同位素。
3. 将膜置于杂交管中.
4. 向每个管中添加 50 mL amjs澳金沙门欢迎您缓冲液.

amjs澳金沙门欢迎您缓冲液[用于 4 个探头]

ddH20	125 毫升
20X SSPE	60 毫升
100X 登哈特溶液	10毫升
20% SDS	5 毫升
鲑鱼精子 DNA[10毫克/毫升; 煮沸 5 分钟，然后在冰上放置 5 分钟，然后添加]	1毫升
总计	200 毫升

1. 膜amjs澳金沙门欢迎您至少 6 小时至过夜.

amjs澳金沙门欢迎您标记

1. 将烧杯中的水在热板上加热至沸腾.
2. 标签组件是

标记组件

DNA	1.amjs澳金沙门欢迎您 [20–50 ng]
ddH20	4.amjs澳金沙门欢迎您 [H 的总体积20 和探头 = 5 µL]
寡核苷酸引物	1.amjs澳金沙门欢迎您
dNTP [5 mM]	1.5μL
克列诺聚合酶	1.amjs澳金沙门欢迎您
10X 克列诺缓冲液	1.5μL
dCTP32P	5.amjs澳金沙门欢迎您
总计	15.amjs澳金沙门欢迎您

1. 结合 ddH₂0, 寡核苷酸引物, 和 1 中的 DNA.5毫升微量amjs澳金沙门欢迎您, 煮4分钟, 并置于冰上.
2. 添加 dNTP, 10X 缓冲区, 克列诺酶, 和³²P. 混合, 短暂旋转, 并让反应在室温下过夜或在 37°C 下放置 2 小时.

色谱柱准备

1. 将玻璃棉添加到 1 mL 注射器的底部，然后放入 15 mL amjs澳金沙门欢迎您中.
2. 使用移液管, 用以下溶液填充注射器葡聚糖凝胶 G-50在 TE 中. 避免柱内出现气泡.
3. amjs澳金沙门欢迎您约 30 秒, 用新鲜的管子重新装满葡聚糖凝胶 G-50解决方案, 并在 1 下离心,500 RPM，持续 4 分钟.
4. 向每根柱中添加 20amjs澳金沙门欢迎您 TE，并在 1 下离心 4 分钟,500 转/分钟.

amjs澳金沙门欢迎您纯化

1. 向每个amjs澳金沙门欢迎您添加 185 µL TE.
2. 剪掉管盖，用移液器从管中吸出所有amjs澳金沙门欢迎您溶液. 将空管放在注射器下方，并将amjs澳金沙门欢迎您添加到色谱柱顶部.
3. 以 1 旋转色谱柱 4 分钟,500 转/分钟.
4. 丢弃该列; 取下带有纯化amjs澳金沙门欢迎您的管子并重新盖上.
5. 为管子添加一个帽锁, 煮4分钟, 并置于冰上.