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金沙6165总站线路检测病理学系

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金沙6165总站线路检测遗传资源中心
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金沙6165总站线路检测加吉姆萨 (FPG) 技术

以下协议适用于洋葱和黑麦, 但也应该适用于金沙6165总站线路检测植物物种. 在金沙6165总站线路检测和金沙6165总站线路检测, 25°C 下的细胞周期时间约为 12 小时. 因此, 在含有 BrdU 的培养基中金沙6165总站线路检测根尖 24 小时会产生足够数量的中期，其中染色体显示四条 DNA 多核苷酸链中的三条掺入了 BrdU, 并允许在 FPG 染色后对姐妹染色单体进行差异染色. 另一方面, 在 BrdU 存在下孵育 12 小时（7 小时就足够了）, 随后用 Thd 和 Urd 金沙6165总站线路检测 17 小时, 导致染色体在一对姐妹染色单体中仅包含一条 BrdU 取代的 DNA 链, 还允许姐妹染色单体的差异染色. 因为细胞周期时间因物种而异，并且还取决于温度, 其他物种的金沙6165总站线路检测时间和温度需要相应调整.

    1. 20°C 培养皿中的潮湿滤纸上的种子发芽.
    2. 将 15 棵幼苗转移到大培养皿中 (>; 20 cm) 当根尖约为 1–1.5厘米长, 含125毫升新鲜配制的金沙6165总站线路检测介质. 金沙6165总站线路检测介质由10组成-4M BrdU，金沙6165总站线路检测 10-8金沙6165总站线路检测，和 10-6M乌尔德, 溶解在自来水中. 在黑暗中25°C孵育根尖7小时（添加FdU是因为它通过抑制胸苷的合成来抑制Thd掺入D金沙6165总站线路检测; 添加尿苷以避免FdU对R金沙6165总站线路检测合成的负面影响）.
    3. 将根尖转移至相同成分的 125 ml 新鲜培养基中，金沙6165总站线路检测; 或 125 ml 新鲜制备的培养基，其中包含 10-4金沙6165总站线路检测 和 10-6M Urd 溶解在自来水中; 金沙6165总站线路检测.
    4. 金沙6165总站线路检测秋水仙碱（终浓度0）.05 %) 过去 3 小时.
    5. 修复卡诺伊 I至少在 5°C 下过夜.
    6. 将根尖转移到 45% 乙酸中 2–3 分钟, 或用果胶酶/纤维素酶或胞质酶消化以软化金沙6165总站线路检测.
    7. 用 45% 乙酸制作南瓜制剂. 根据下述 FPG 技术检查相差和染色下的铺展质量.
    8. 用干冰去除盖玻片.
    9. 金沙6165总站线路检测 96% 的幻灯片, 70 %, 50 %, 及30%乙醇系列, 然后是蒸馏水, 最后风干.
    10. 用 0 将载玻片处理 1 小时.01% 核糖核酸酶 A (Sigma R-4875, 来自牛胰腺）溶解在0.5 X 金沙6165总站线路检测.
    11. 在 0 中短暂冲洗.5 X 金沙6165总站线路检测.
    12. 用荧光染料 Hoechst 33258 (H 33255 染色 30 分钟, 双苯甲亚胺, ICN 生物医学公司. #190304)（1 mg H 33258 溶解在 1 ml 乙醇中, 添加0.1 毫升该溶液至 200 毫升 0.5 X 金沙6165总站线路检测).
    13. 在 0 中短暂冲洗.5 X 金沙6165总站线路检测.
    14. 用 0 覆盖幻灯片.5 X 金沙6165总站线路检测 并暴露在紫外线下（Osram HNS, 30W, 254 nm) 1小时.
    15. 在 0 中孵化.5 X 金沙6165总站线路检测，55°C，水浴 1 小时.
    16. 用 Soerensen 金沙6165总站线路检测盐缓冲液 pH 6 中的 3% Giemsa (Merck 3204) 染色.8.
金沙6165总站线路检测 的缓冲区
库存污点
A 部分磷酸氢二钠 (金沙6165总站线路检测2跳4)9.47克/升H2O 58 毫升
B 部分金沙6165总站线路检测二氢钾 (KH2订单4)9.07克/升H2O
4金沙6165总站线路检测升
  1. 在 0 中短暂冲洗.5 X 金沙6165总站线路检测 并风干（通过浸泡在二甲苯中并安装在 Euparal 或 Permount 中可以使载玻片永久化）.

解决方案

  • 10-4金沙6165总站线路检测（5-溴-2'-脱氧尿苷, 西格玛 B-5002)：30.7毫克/升蒸馏水.
  • 10-4金沙6165总站线路检测（2'-脱氧胸苷, 西格玛 T-5018)：24.2毫克/升蒸馏水.
  • 10-6M Urd（尿苷）, Sigma U-3750)：储备溶液为 1.2 毫克/100 毫升蒸馏水; 每升蒸馏水金沙6165总站线路检测20 mL储备液.
  • 5×10-8M FdU（5-氟​​-2'-脱氧尿苷, Sigma F-0503)：储备溶液为 1.2 毫克/100 毫升蒸馏水; 每升蒸馏水金沙6165总站线路检测 1 mL 储备液.
  • 0.5 X 金沙6165总站线路检测（准备 88 的 20 X 金沙6165总站线路检测 原液）.2 g 柠檬酸三钠-2-水合物 (Na3C6H5O7·2H2O) 加 175.3克氯化钠, NaCl/L蒸馏水. 此溶液可以保存几个月; 使用前用蒸馏水稀释 1:39 0.5 X 金沙6165总站线路检测处理液.