1. K州之家
  2. »WGRC
  3. »电子实验室手册
  4. »单子叶植物 DNA 的 amjs澳金沙门欢迎您和南杂交程序

js金沙3983总站 成功的候选人将加入一个充满活力的研究团队

amjs澳金沙门欢迎您州立大学
amjs澳金沙门欢迎您病理学系

4024 斯罗克莫顿
克拉夫林路 1712 号
曼哈顿,amjs澳金沙门欢迎您州 66506-5502
785-532-6176
785-532-5692 传真
wgrc@k-state.edu

amjs澳金沙门欢迎您遗传资源中心
amjs澳金沙门欢迎您小麦创新中心

1990 金博尔大道
曼哈顿,amjs澳金沙门欢迎您州 66502
785-320-4383

单子叶植物 DNA 的 amjs澳金沙门欢迎您和南杂交程序

amjs澳金沙门欢迎您

    1. 按如下方式制作鸡尾酒:
南方杂交鸡尾酒
amjs澳金沙门欢迎您 缓冲区
3.50 µL
BSA [库存:10 毫克/毫升]
0.35 µL
ddH20
5.65 µL
RNase [库存:100 mg/mL]
0.50 毫升
生态RI [12 单位/μL]
10.00 µL
总计
20.00 µL/管
  1. 将 15 µL [20–25 µg] amjs澳金沙门欢迎您 添加到每个含有 20 µl 混合物的试管中. 移液器多次混合.
  2. 将样品在 37°C 烤箱中孵育过夜 [至少 10 小时].

南方杂交

  1. 用 50 μL 10 mg/mL 溴化乙锭对amjs澳金沙门欢迎您染色 30 分钟并拍照.
  2. 用 1 L 0 处理amjs澳金沙门欢迎您.25M HCl 室温 25 分钟,轻轻摇晃[上样缓冲液的颜色将变成亮黄色].
  3. 用蒸馏水冲洗amjs澳金沙门欢迎您两次并用 1 L 0 处理.4M NaOH 20 分钟,轻轻摇晃[上样缓冲液的颜色将恢复为蓝色].
  4. 在玻璃皿中加入 2 L 0.amjs澳金沙门欢迎您,并在顶部放置一个玻璃板. 将一张“23 x 30 cm”的 3MM 色谱纸放在板上,使两端浸入液体中[“灯芯”]. 弄湿纸并通过在纸上滚动玻璃吸管去除所有气泡.
  5. 湿两个'22.5 x 22.5 厘米' 的色谱纸,带有 0.4M NaOH 并放置在芯片顶部. amjs澳金沙门欢迎您.
  6. 将amjs澳金沙门欢迎您放在纸上表面朝下, 然后在amjs澳金沙门欢迎您上放置一张尼龙膜. 将amjs澳金沙门欢迎您修剪至膜的精确尺寸. 按照步骤 4 去除所有气泡.
  7. 在两半amjs澳金沙门欢迎您之间放置一条塑料条.
  8. 弄湿两张“10 x 20 cm”层析纸并放在膜上. amjs澳金沙门欢迎您.
  9. 覆盖所有区域, amjs澳金沙门欢迎您除外, 用保鲜膜包裹以防止蒸发并确保毛细管运动仅通过amjs澳金沙门欢迎您.
  10. 将一大叠纸巾放在amjs澳金沙门欢迎您区域的顶部. 将玻璃板放在两叠纸巾上,并在玻璃板顶部放置重物. 让印迹静置过夜[至少 20 小时].
  11. 用 2X amjs澳金沙门欢迎您 冲洗膜 5–10 分钟. 立即使用或湿存放.

尼龙转移膜:Hybond-XL硝化纤维素膜, amjs澳金沙门欢迎您号 RPN203S; GE 医疗保健, 百年大道 800 号, P.O. 1327号信箱, 皮斯卡塔韦, 新泽西州 08855-1327, 美国; 1-800-526-3593;http://www5.amjs澳金沙门欢迎您lifesciences.com.