单子植物 js6666zs金沙 分离
- 收集新鲜js6666zs金沙并储存于-20°C.
- 在预冷的研钵中用液氮将叶js6666zs金沙研磨成细粉[将研钵和杵储存在-20°C 或-80°C].
- 用冷冻画笔将地面组织转移到充分冷冻的容器中, 5js6666zs金沙聚丙烯管并储存在 -20°C 下.不要让粉末解冻.所有工具均应在液氮中冷却.
- 向提取缓冲液中添加亚硫酸氢钠，并用 5N NaOH 将 pH 调节至 7.8–8.0. 将提取缓冲液加热至 65°C，并将 15–20 ml 添加到 10–15 ml 冷冻js6666zs金沙中. 搅拌均匀.
| 1 升 | [最终] | |
|---|---|---|
| 5M 氯化钠 | 100.js6666zs金沙 | 500 mM |
| 1M Tris-HCl pH 8.0 | 100.js6666zs金沙 | js6666zs金沙M |
| 0.5M EDTA pH 8.0 | 100.js6666zs金沙 | 50 mM |
| 20% SDS | 62.5 毫升 | 0.84%（w/v） |
用js6666zs金沙蒸馏水定容至最终体积.注意：js6666zs金沙 0.使用前使用 38 g 亚硫酸氢钠/100 mL 提取缓冲液，并将 pH 值重新调节至 7.8–8.0，含 5N NaOH. | ||
- js6666zs金沙 30 分钟; 每 5-10 分钟翻转一次试管.
- 将氯仿:异戊醇[24:1 v/v]js6666zs金沙到管顶部并剧烈混合.
- 4 号离心机 15 分钟,500转/分钟. 通过倒入 2-4 层粗棉布将上相转移到新的 5js6666zs金沙试管中，如果界面不呈现固体，则用吸管吸走上相.
- 添加 2 体积（将管填充到顶部）冷 [-20°C] 95% EtOH，轻轻混合以沉淀 js6666zs金沙. -20°C 放置 30–60 分钟.
- 倒掉 95% 的乙醇, 用新鲜的 70% EtOH 清洗, 并添加 30 毫升冷 70% EtOH. 轻轻混合几分钟. js6666zs金沙 可无限期保留在 70% EtOH 中[可在 -20°C 下放置过夜].
- 如果 js6666zs金沙 仍然变色，请用新鲜的 70% EtOH 重新清洗. 将 js6666zs金沙 挂在巴斯德移液器上，然后用 Kimwipe 擦掉多余的 70% EtOH. 将 js6666zs金沙 转移到无菌 1 的底部.5毫升微量离心管. 如果进行多次提取, 轻轻离心湿 js6666zs金沙, 然后翻转管几分钟，让液体排出. 在室温下干燥 js6666zs金沙 2–3 小时.
- 将 js6666zs金沙 溶解于js6666zs金沙TE [0.5–1 mL，取决于颗粒大小]. 在 65°C 水浴中孵育直至溶解，每 30 至 60 分钟轻轻翻转一次，或直至 js6666zs金沙 溶解[可能需要几个小时].
- 在微量离心机中以 13 离心 10 分钟,000 rpm 以去除任何不进入溶液的材料.
- 通过在琼脂糖凝胶上分离 1:20 稀释液 [1 js6666zs金沙:20 TE:1 上样缓冲液] 以及标记物（浓度为 10 的未切割 lambda js6666zs金沙）来确定 js6666zs金沙 浓度, 20, 50, 和 80 纳克). 用 0 对凝胶进行染色.5 μg/ml 溴化乙锭，15 分钟并拍照. 目视比较 js6666zs金沙 带的强度与标记以确定浓度.
